拒绝实为定量，数字PCR如何回归真定量！

固疑往往也许于泊松分布导致的期望绝对值，由于同类型的遗传物质监测都是定调的，人们早就习惯持续性了阳持续性或者阴持续性的“已确定调”结果，而不习惯持续性于长期存在期望绝对值和不已确定度的“不已确定调”结果。但是事实的情况是就越能推算出期望绝对值和不已确定复线的结果就越准确，只给出阴阳持续性的结果就越不准确。

三、小仅点PCR的方通则有正确持续性

一个完整的小仅点PCR方通则有最主要了小仅点PCR璇、适配该璇器的醛、程序来会磁持续性的优化和最佳反不应必要条件。在不会经过确实正确持续性之前所，“傻瓜样式”快速创建的小仅点PCR方通则有很难能成为一个精确天体物理学合成的方通则有，只是一个可证天体物理学合成方通则有。天体物理学合成监测与定调监测最主要的差异是天体物理学合成方通则有并不需要对平均监测若无、平均天体物理学合成若无和正确度来进行正确持续性。

1.精密度Precision

精密度可划分方通则有的一般而言（repeatability），里面间精密度（intermediate precision）和描摹持续性（reproducibility）。在实验室内部正确持续性时，不应已确定方通则有的一般而言和里面间弹道。可以使用单因素方差科学研究（ANOVA），推算一般而言。

2.线持续性Linearity

通过对预期遗传物质其所与捕捉到到的遗传物质其所来进行回归科学研究，以梯度和线持续性关系R来也就是说该范围内的线持续性度。

捕捉到绝对值与期望绝对值的期望梯度为1.0，截距为（0,0）。建言梯度在0.95至1.05之间。线持续性关系R2不应大于0.99。

3.正确度Trueness

测比率正确度是该方通则有产生的无若无个结果（即本质里面的大比率结果）的平均仅与接纳参考绝对值间的一致程度。优先使用有证国际标准物固给予合适的参考绝对值。

4.稳健持续性Robustness

在稳健持续性测试里面，不应科学研究关的方通则有表达式里面的小正确对方通则有持续性能和测比率结果的制约。也许制约方通则有结果的关的表达式，如程序来会和磁持续性的沸点、PCR醛的成分、PCR璇和烧结湿度。

5.基因表达specificity

不应分析科学研究对预期目的的基因表达以及与典型微生物电子束里面也许长期存在的同源仅列的潜在交错反不应持续性。

6.平均监测若无limit of detection，LOD

可被检出的平均沸点。LOD在各不相同国际标准里面有各不相同的推算方样式，如：观察赞扬通则，反之亦然国际标准正确通则、国际标准方程组通则和数据压缩通则。对于小仅点PCR的LOD分析我个人比较倾向于使用反之亦然国际标准正确通则分析LOD。

反之亦然国际标准正确通则：既通过科学研究大比率的电子束反之亦然或投身于平均可接纳沸点的电子束反之亦然来已确定LOD。独立自主测试的次仅不应不少于10次，推算监测结果的国际标准正确，推算方通则有见下表：

7.平均天体物理学合成若无limit of quantitation，LOQ

电子束里面的科学研究物可被天体物理学合成监测的平均沸点。并不一定建言反之亦然绝对值加上10倍一般而言国际标准正确，也可以3倍的LOD或优于方通则有表明里面使用平均加标比率的50%作为LOQ。

我从2012年就开始接触小仅点PCR，后来因为直至专门从事遗传物质国际标准物固的科学研究，并不需要大幅度的开发小仅点PCR的天体物理学合成方通则有，现在早就使用过的小仅点PCR璇约莫有10种。小仅点PCR本不应定位为一个高灵敏度和弹道的天体物理学合成工具箱，各新产品不应定位于如何大幅提高璇器的精密度和弹道，筛选最最简单的反不应体系，开放平台扶植专业的方通则有开发者。但是现在的一种不良倾向是大家都在tu硬件持续性能（微滴仅更多，萤光通道更多），不必要宣传自己平台的持续持续性和通用持续性，回避普通使用者自己创建天体物理学合成方通则有的难度。硬生生把一个天体物理学合成工具箱变成了更灵敏的定调或可证天体物理学合成工具箱。小仅点PCR是时候回归真天体物理学合成了！

请注意：

ISO 20395:2019 Biotechnology — Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences — qPCR and dPCR GB/T 27415-2013 科学研究方通则有检出若无和天体物理学合成若无的分析 发表声明：本微信注明也许的稿件均为转载，仅运用于分享，不都有平台立场，如涉及版权等难题，叮嘱尽快连系我们，我们第一间隔时间更正，对不起！

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